免疫组织化学抗原修复
由于石蜡切片标本多数使用甲醛固定，甲醛在组织中所形成的醛键、羧甲基等封闭了部分抗原决定簇，或由于蛋白分子之间的交联而使抗原决定簇隐蔽。因此在染色前有些抗原需要*行抗原修复或暴露才能使组织中的抗原抗体充分结合，出现理想的染色结果。至于哪种抗原需要进行修复。需在建立染色程序时确定。常用的方法有加热抗原修复法和酶消化法两种。经大量试验验证．加热抗原修复法优于酶消化法，其机制目前仍不清楚，可能是加热打开了组织抗原因甲醛固定所引起的抗原决定簇的交联，因此使免疫组织化学染色的敏感度大幅度提高。
(1)加热修复法：加热修复法分为高压加热修复法和微波修复法两种：
①高压加热修复法：取一定量枸橼酸盐缓冲液(ph＝6．0)于高压锅中，大火加热直至沸腾。将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放人己沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣紧压力阀，继续加热至喷汽。从喷汽开始计时．1～2分钟后，高压锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗2次，再用pbs冲洗2次，每次3分钟。注意加热时间长短的控制很重要，从组织切片放人缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5―8分钟为好．时间过长可能会使染色背景加深。缓冲液的量必须保证能浸泡到所有切片，用过的枸橼酸缓冲液不能反复使用。
②微波修复法：取一定量ph 6．0枸橼酸盐缓冲液(缓冲液量不得小于500m1)，于微波盒中，微波加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上。放人己沸腾的缓冲液中，中微波继续处理15―20分钟，取出微波盒冷却至室温，从缓冲液中取出玻片。先用蒸馏水冲洗2次，之后用pbs冲洗2次，每次3分钟。
(2)*消化修复法：主要用于细胞内抗原的显示。使用0．1％氯化钙液(ph7．8)制成0．1％*液，37℃孵育切片15～30分钟，之后用pbs洗涤3次，每次3分钟。
(3)*消化修复方法：主要用于细胞间质抗原的显示。一般使用浓度为0.4％，消化时间为37℃，30～180分钟。
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①高压加热修复法：取一定量枸橼酸盐缓冲液(ph＝6．0)于高压锅中，大火加热直至沸腾。将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放人己沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣紧压力阀，继续加热至喷汽。从喷汽开始计时．1～2分钟后，高压锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗2次，再用pbs冲洗2次，每次3分钟。注意加热时间长短的控制很重要，从组织切片放人缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5―8分钟为好．时间过长可能会使染色背景加深。缓冲液的量必须保证能浸泡到所有切片，用过的枸橼酸缓冲液不能反复使用。
②微波修复法：取一定量ph 6．0枸橼酸盐缓冲液(缓冲液量不得小于500m1)，于微波盒中，微波加热直至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上。放人己沸腾的缓冲液中，中微波继续处理15―20分钟，取出微波盒冷却至室温，从缓冲液中取出玻片。先用蒸馏水冲洗2次，之后用pbs冲洗2次，每次3分钟。
(2)*消化修复法：主要用于细胞内抗原的显示。使用0．1％氯化钙液(ph7．8)制成0．1％*液，37℃孵育切片15～30分钟，之后用pbs洗涤3次，每次3分钟。
(3)*消化修复方法：主要用于细胞间质抗原的显示。一般使用浓度为0.4％，消化时间为37℃，30～180分钟。
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