艾美捷 SiR-Actin试剂盒使用方法和注意事项说明
sir-actin基于f-肌动蛋白结合天然产物茉莉素内酯。sir-actin具有荧光、细胞渗透性和对 f-肌动蛋白的高度特异性。sir-肌动蛋白染色内源性 f-肌动蛋白，无需遗传操作或过度表达。它在远红光中的发射最大限度地减少了光毒性和样品自发荧光。sir-actin与gfp和/或m-樱桃荧光蛋白相容。它可以使用标准 cy5 滤光片集进行成像。sir-肌动蛋白可用于活细胞和组织中的宽场、共聚焦、sim 或 sted 成像。探针数量允许 50 – 200 次染色实验。
艾美捷sir-actin试剂盒#cy-sc001光学特性：
λ腹肌652 纳米
λ埃姆674 纳米
ε.max1.0·105摩尔-1·厘米-1
*基于以下条件：0.5 – 1 ml染色溶液/0.5 – 1 um探针浓度的染色实验。通过减少体积或探针浓度，可以进一步增加染色实验的数量。
sir-actin试剂盒使用注意事项：
注：该方案使用粘附在盖玻片上的人成纤维细胞进行了优化，并已在其他常见疾病中得到证实细胞系。实验方案的建议应作为起点，并为每种方案提供极-佳标记条件，细胞类型应该根据经验来确定。sir肌动蛋白是以肌动蛋白稳定药物茉莉花内酯为基础的。因此，它可以修改活细胞中的肌动蛋白动力学。而有丝分裂持续时间在浓度高达3时保持不变mm sir肌动蛋白，浓度高于100nm导致培养的hela细胞中的细胞增殖指数降低1）。如果计划进行长期成像实验肌动蛋白动力学是至关重要的，我们建议保持sir肌动蛋白的浓度等于或低于100nm。出于其他目的：
1.建议使用m sir肌动蛋白进行染色。
准备1mm储备溶液。将小瓶中的sir肌动蛋白溶解在50μl无水二甲基亚砜中，制成1mm原液解决方案该溶液应储存在-20°c或更低的温度下。不要把溶液分成小份，它们会腐烂得更快并且该化合物不会通过多次冻融循环而改变。如果储存得当，该储备溶液应稳定三年
月或更长时间。如果需要准确测定储备溶液的浓度，则稀释1ml在99中的1mm储备溶液
ml含有0.2%十二烷基硫酸钠的pbs。在室温下15分钟后，测量652nm处的吸光度。计算使用上面给出的消光系数的浓度。
2.准备染色溶液。
在细胞培养基（例如dmem+10%胎牛）中将sir肌动蛋白稀释至所需浓度血清）和涡流。由于染色效率可能取决于细胞系，因此建议用1mm在首先尝试快速获得强染色，然后在进一步的实验中降低sir肌动蛋白浓度，直到极-佳实现染色（参见下面的标记浓度和培养时间表）。一些细胞系可能表达高水平的外排泵，并且被sir肌动蛋白染色不良。增加10mm维拉帕米，一种广谱外排泵抑制剂，在染色中溶液通常会大大改善染色效果。
sir-actin试剂盒储存方法：
将化合物储存在-20°c以下。准备使用无水dmso的化合物溶液。保持使用后低于-20°c的化合物溶液。小瓶之前应允许将其加热至室温开放如果储存得当，化合物应稳定了几个月。注：二甲基亚砜溶液应特别小心处理，因为已知二甲基亚砜促进有机分子进入组织。处置这些试剂符合当地所有相关规定条例。
相关文献参考：
1. fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton, g. lukinavičius et al., nature methods, 11, 731–733 (2014)
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*基于以下条件：0.5 – 1 ml染色溶液/0.5 – 1 um探针浓度的染色实验。通过减少体积或探针浓度，可以进一步增加染色实验的数量。
sir-actin试剂盒使用注意事项：
注：该方案使用粘附在盖玻片上的人成纤维细胞进行了优化，并已在其他常见疾病中得到证实细胞系。实验方案的建议应作为起点，并为每种方案提供极-佳标记条件，细胞类型应该根据经验来确定。sir肌动蛋白是以肌动蛋白稳定药物茉莉花内酯为基础的。因此，它可以修改活细胞中的肌动蛋白动力学。而有丝分裂持续时间在浓度高达3时保持不变mm sir肌动蛋白，浓度高于100nm导致培养的hela细胞中的细胞增殖指数降低1）。如果计划进行长期成像实验肌动蛋白动力学是至关重要的，我们建议保持sir肌动蛋白的浓度等于或低于100nm。出于其他目的：
1.建议使用m sir肌动蛋白进行染色。
准备1mm储备溶液。将小瓶中的sir肌动蛋白溶解在50μl无水二甲基亚砜中，制成1mm原液解决方案该溶液应储存在-20°c或更低的温度下。不要把溶液分成小份，它们会腐烂得更快并且该化合物不会通过多次冻融循环而改变。如果储存得当，该储备溶液应稳定三年
月或更长时间。如果需要准确测定储备溶液的浓度，则稀释1ml在99中的1mm储备溶液
ml含有0.2%十二烷基硫酸钠的pbs。在室温下15分钟后，测量652nm处的吸光度。计算使用上面给出的消光系数的浓度。
2.准备染色溶液。
在细胞培养基（例如dmem+10%胎牛）中将sir肌动蛋白稀释至所需浓度血清）和涡流。由于染色效率可能取决于细胞系，因此建议用1mm在首先尝试快速获得强染色，然后在进一步的实验中降低sir肌动蛋白浓度，直到极-佳实现染色（参见下面的标记浓度和培养时间表）。一些细胞系可能表达高水平的外排泵，并且被sir肌动蛋白染色不良。增加10mm维拉帕米，一种广谱外排泵抑制剂，在染色中溶液通常会大大改善染色效果。
sir-actin试剂盒储存方法：
将化合物储存在-20°c以下。准备使用无水dmso的化合物溶液。保持使用后低于-20°c的化合物溶液。小瓶之前应允许将其加热至室温开放如果储存得当，化合物应稳定了几个月。注：二甲基亚砜溶液应特别小心处理，因为已知二甲基亚砜促进有机分子进入组织。处置这些试剂符合当地所有相关规定条例。
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1. fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton, g. lukinavičius et al., nature methods, 11, 731–733 (2014)
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