人假定蛋白LOC677168 elisa试剂盒操作步骤
人假定蛋白loc677168 elisa试剂盒操作步骤：
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2400pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
1200pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
600pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
300pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
150pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
小鼠scd40配体(mouse scd40 ligand)
小鼠cd34(mouse cd34)
小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(mouse scd40l)
小鼠补体c3a(mouse c3a)
小鼠补体c5a(mouse c5a)
小鼠血清总补体(mouse ch50)
小鼠肌酸激酶(mouse ck)
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse ck-mb)
小鼠羟甲基赖氨酸(mouse cml)
小鼠c-肽(mouse c-peptide)
小鼠粒细胞集落刺激因子(mouse g-csf)
小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse gm-csf)
小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mouse m-csf)
小鼠双链dna(mouse dsdna)
小鼠多巴胺(mouse dopamine)
小鼠二胺氧化酶(mouse dao)
小鼠d-二聚体(mouse d-dimer)
小鼠二肽基肽酶ⅳ(mouse dpp4)
小鼠β内啡肽(mouse β-ep)
小鼠表皮生长因子(mouse egf)
小鼠表皮生长因子受体(mouse egf r)
小鼠内皮素-1(mouse endothelin-1)
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse eotaxin)
小鼠促红细胞生成素(mouse epo)
小鼠红细胞生成素受体(mouse epor)
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ecp)
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600pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
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2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
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9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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