细胞冻存的正确方法你用对了吗
我们在做细胞实验的时候经常会有冻存的的情况，但细胞冻存的正确方法你用对了吗?
首先冷冻保存方法:
1、传统方法：冷存管置于4c10分钟-->-20c30分钟-->-80c 16~ 18小时(或隔夜)-->液氮槽vaporphase长期储存。
-20c不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80c冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
2、程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1~-3c/分钟之速度由室温降至(-80c以下) -120c，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
3、hakata无血清细胞冻存： 加入hakata无血清细胞冻存液制成悬液，直接冻于-80°c，可保存≥5年。
其次操作步骤:
1、冷冻前24-48小时更换半里或全里培养基，使细胞处于指数生长期。
2、配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚矾(dmso)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
3、离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少里细胞悬浮液(约0.1m1)计数细胞浓度及冻前存活率。
4、取与细胞悬液等里的冻存液，缓慢逐商加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液( dmso醉后浓度为5~ 10%)，使细胞浓度为1~5x 10*cells/ml，混合均匀，分装于已标示*之冷冻保存管中，1~ 2nl/mal,并取.少里细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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2、配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚矾(dmso)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
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