用嘌呤霉素筛选细胞的方法你知道么
嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与trna分子末端类似的结构，能够同氨基酸结合，代替氨酰化的trna同核糖体的a位点结合，并掺入到生长的肽链中。用嘌呤霉素筛选细胞方法如下：
嘌呤霉素筛选细胞
转染(24孔板进行)或电转后培养24小时，按10%密度传代(传至36mm平皿)，继续培养24小时，待细胞密度增至20%-25%回合时;
去掉培养液，pbs洗一次，加入按照最佳嘌呤霉素筛选细胞的浓度(杀伤曲线试验确定)配制好的嘌呤霉素筛选细胞培养基2-3ml。
根据培养基的颜色和细胞的存活情况，每隔2天更换一次嘌呤霉素筛选细胞用培养基(培养基用量为2-4ml，细胞多，多家培养基，细胞少，少加培养基)，一般在3-1天内出现细胞大量或少量死亡情况(如果转染效率或电转效率高，则死亡少;
如果转染率或电转率低，则死亡多;如果筛选浓度偏低，嘌呤霉素筛选细胞培养基用量少，细胞密度大于80%，会导致大量假阳性克隆)。
如果少选第一周，出现细胞大量死亡，则在原培养皿中继续加入嘌呤霉素筛选细胞培养基筛选一周;如果删选第一周，出现细胞少量死亡，则把细胞按照10%密度传代(传至35mm平皿，传一个皿即可，多余细胞丢弃)，利用少选培养基进行筛选一周;
筛选第二周结束后，则把细胞消化下来。进行重点稀释(10ul培养基中含1个细胞，用筛选培养基)，把上述10ul细胞悬液假日96孔板中(提前加入40ul筛选培养基)，伊红加入24孔，4小时候观察每个孔的情况。记录只含一个细胞的孔，含有一个细胞的孔用于继续筛选，其余孔舍弃;
根据培养基的颜色和细胞生长情况换入新的嘌呤霉素筛选细胞用培养基待细胞密度为80%时，将其传代至24孔板中增殖，待细胞密度为80%时，将其传代至6孔板中增殖，待细胞密度为80%时，将其传代至t25瓶(一传3)中增殖，每隔3天换液。
细胞大量扩增后，一瓶用于提取中rna进行qpcr检测，一瓶用于总蛋白进行wb检测，另一瓶用于保种，根据qpcr和wb结果取舍阳性克隆。
嘌呤霉素筛选细胞方法如上，具体的嘌呤霉素筛选细胞让发如上，嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放;
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°c，保质期为2年。
QV96-TP210便携式精密酸度计适用范围及技术指标
BMD703-400 非常重要的部件---旋转头
高低温交变湿热试验机的压缩机排气量不足该如何处理？
X射线荧光光谱仪从头到尾的使用细节有哪些
低温速冻箱其主要的特性是什么？
用嘌呤霉素筛选细胞的方法你知道么
UGF橡套电缆UGF高压橡套电缆
磨床纸带过滤器的工作方式
影响氮吹浓缩仪浓缩效果的关键因素
防水橡套电缆jhs潜水电缆500V-3*50+1*16
螺杆泵的工作原理和注意事项
让软膏灌装封尾机爆发能量，真正做到物尽其用
使用石墨炉原子吸收分光光度法需注意的问题
二手自动压滤机概述和基本介绍及特点
翻缸真空捏合机详细介绍
HYDAC蓄能器SB330系列的工作原理你了解吗?
具体分析一下真空管式炉的使用区别
美国奥立龙320C-06A便携式电导率仪（超纯水）
TESA高度仪400/700资料说明书
德国SICK施克伺服编码每个基准的角度发出一个与该角度对应二进制的数值
嘌呤霉素筛选细胞
转染(24孔板进行)或电转后培养24小时，按10%密度传代(传至36mm平皿)，继续培养24小时，待细胞密度增至20%-25%回合时;
去掉培养液，pbs洗一次，加入按照最佳嘌呤霉素筛选细胞的浓度(杀伤曲线试验确定)配制好的嘌呤霉素筛选细胞培养基2-3ml。
根据培养基的颜色和细胞的存活情况，每隔2天更换一次嘌呤霉素筛选细胞用培养基(培养基用量为2-4ml，细胞多，多家培养基，细胞少，少加培养基)，一般在3-1天内出现细胞大量或少量死亡情况(如果转染效率或电转效率高，则死亡少;
如果转染率或电转率低，则死亡多;如果筛选浓度偏低，嘌呤霉素筛选细胞培养基用量少，细胞密度大于80%，会导致大量假阳性克隆)。
如果少选第一周，出现细胞大量死亡，则在原培养皿中继续加入嘌呤霉素筛选细胞培养基筛选一周;如果删选第一周，出现细胞少量死亡，则把细胞按照10%密度传代(传至35mm平皿，传一个皿即可，多余细胞丢弃)，利用少选培养基进行筛选一周;
筛选第二周结束后，则把细胞消化下来。进行重点稀释(10ul培养基中含1个细胞，用筛选培养基)，把上述10ul细胞悬液假日96孔板中(提前加入40ul筛选培养基)，伊红加入24孔，4小时候观察每个孔的情况。记录只含一个细胞的孔，含有一个细胞的孔用于继续筛选，其余孔舍弃;
根据培养基的颜色和细胞生长情况换入新的嘌呤霉素筛选细胞用培养基待细胞密度为80%时，将其传代至24孔板中增殖，待细胞密度为80%时，将其传代至6孔板中增殖，待细胞密度为80%时，将其传代至t25瓶(一传3)中增殖，每隔3天换液。
细胞大量扩增后，一瓶用于提取中rna进行qpcr检测，一瓶用于总蛋白进行wb检测，另一瓶用于保种，根据qpcr和wb结果取舍阳性克隆。
嘌呤霉素筛选细胞方法如上，具体的嘌呤霉素筛选细胞让发如上，嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放;
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°c，保质期为2年。
QV96-TP210便携式精密酸度计适用范围及技术指标
BMD703-400 非常重要的部件---旋转头
高低温交变湿热试验机的压缩机排气量不足该如何处理？
X射线荧光光谱仪从头到尾的使用细节有哪些
低温速冻箱其主要的特性是什么？
用嘌呤霉素筛选细胞的方法你知道么
UGF橡套电缆UGF高压橡套电缆
磨床纸带过滤器的工作方式
影响氮吹浓缩仪浓缩效果的关键因素
防水橡套电缆jhs潜水电缆500V-3*50+1*16
螺杆泵的工作原理和注意事项
让软膏灌装封尾机爆发能量，真正做到物尽其用
使用石墨炉原子吸收分光光度法需注意的问题
二手自动压滤机概述和基本介绍及特点
翻缸真空捏合机详细介绍
HYDAC蓄能器SB330系列的工作原理你了解吗?
具体分析一下真空管式炉的使用区别
美国奥立龙320C-06A便携式电导率仪（超纯水）
TESA高度仪400/700资料说明书
德国SICK施克伺服编码每个基准的角度发出一个与该角度对应二进制的数值