凋亡的形态学特征

发生凋亡的细胞,其表面的微绒毛消失,并逐步脱离与周围细胞的接触。形态上,凋亡细胞首先变圆,与邻近细胞脱离,失去微绒毛,胞质脱水浓缩,胞膜迅速发生空泡化(bleb-bing),细胞体积逐渐缩小,出现固缩(condensation),内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合,形成膜表面的芽状突起,称为出芽(buding)。晚期,核染色质高度浓缩融合成团状,核染色质密度增高呈半月形或马蹄形分布,并凝集在核膜周边,称为染色质边集(margination)。核仁裂解,进而胞膜皱缩内陷,自行分割为多个外部有膜包裹的、内含物不外泄的泡状小体,称为凋亡小体(apoptosis body),最终被邻近细胞所识别、吞噬消化,或自然脱落而离开生物体。
其dna迅速被核酶所降解,产生若干个大小不同的寡核苷酸碎片,在琼脂糖凝胶电泳上呈现阶梯状核蛋白区带图谱。由于酶切的位点在核小体处,而核小体的核苷酸为180bp,所以产生不同倍数的180~200个碱基对的核酸片段电泳区带。但在整个过程中,线粒体内的 dna并不发生断裂。
由于这种死亡过程没有溶酶体酶及胞膜破裂,所以,细胞内涵物不外泄。近年来的研究发现,凋亡细胞表面有糖蛋白的末端唾液酸残基发生丢失,膜磷脂层不对称性被破坏﹑磷脂酰丝氨酸暴露等改变,均可以促使吞噬细胞对凋亡细胞的识别,凋亡时常常无炎症反应也正是因为这个缘故,因此长期以来凋亡一直未引起人们的重视。
通过流式细胞仪等方法观察发现,凋亡与死亡有明显的差异(表21-1),凋亡细胞具有以下特征:①由于细胞核酸内切酶激活,使dna特征性荧光染色减少。②细胞质膜保持一定的完整性。③线粒体跨膜电位下降。④保留atp依赖的溶酶体质子泵。⑤细胞蛋白含量明显减少,系由内源性蛋白酶被激活,蛋白质酶解增加所致.⑥在胸腺细胞,凋亡发生在g。期。⑦光吸收减少,直角散射不变(hl-60细胞)或增加(胸腺细胞)。
细胞凋亡的发展包括两个不同时期:
(1)致死前期(prelethal stage):是凋亡时细胞损伤的早期,具有可逆性,此时出现细胞皱缩、核染色质固缩、胞质中含空泡等变化,最后出现线粒体肿胀。
(2)致死期(lethal stage):凋亡细胞进入死亡阶段,此时变化不可逆,出现质膜连续性破坏和染色质严重固缩、融化及肿胀的线粒体中絮状集结和(或)钙化。这常常见于脱落的凋亡细胞中,或吞噬了致死前期空泡片段的邻近细胞的溶酶体中。

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