细胞培养常见疑问
细胞培养常见疑问
培养基中丙酮酸钠的作用是什么？
答：丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果
没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
倒置相差显微镜
倒置显微镜一般构造与普通显微镜一样有物镜目镜光源光路系统等。但倒置显微镜的光源位于在载物台上放，光线由上至下照射到观察物上，物镜则位于载物台下方，观察培养细胞多用放大倍数为 10×和 20×的物镜，目镜为 10×。
ø 擦拭镜头可用沾酒精/乙混合液或二甲苯的镜头纸或脱脂棉。
ø 擦拭涂漆表面，可用纱布除去灰尘。若有油渍污垢，用纱布沾少许汽油去除，不能用有机溶剂
(如：酒精乙和其它稀释剂)擦拭涂漆表面和塑料部件。
ø 仪器不使用时，用有机玻璃或聚乙烯罩上，并存放于干燥且没有霉菌滋生的地方。
ø 物镜和目镜放在有干燥剂的密闭容器中。
1、我把细胞从-80度的冰箱拿出来复苏，期间没有污染，放二氧化碳孵箱后*天在显微镜下看，发现很多漂浮的死细胞，贴壁的细胞很少，但培养液是清亮、桃红色的，液面上可见漂浮着很多死细胞(我用的是dmem+10%胎牛血清的培养液)；我又把它放回孵箱；第二天看，和*天一样，我就换液了；第三天看，镜下基本未见什么细胞了。之前师兄给我说这种细胞长得慢(甲状腺癌k1细胞)，但是不至于不长，说明没有复苏成功。
可能的原因有：
a. -80度冻存细胞的时间太长，一般如果需要长期保存的话，超过一个月。转入液氮。
原有的冻存细胞状态就不好，表现为细胞活力不够，细胞密度不高。
换液太快，培养体系太大，如果细胞状态不好，保持较小的培养容积，以获得较高的细胞密度。如果培养基还是桃红色，说明细胞的代谢活动很弱，此时不宜换液。不知道你这个细胞是喜欢聚集生长还是离散生长。根据条件调节。比如，如果喜欢聚堆长，建议先倾斜培养瓶/皿，2h为一个时间间隔，观察细胞状态，以作调整。
b.估计是细胞在冻存时消化过度，导致细胞状态不好。
如果*天能见到贴壁的话,说明还是可以的.有时候培养基颜色偏紫,细胞贴壁会有问题的.你核实一下你培养基颜色是否偏碱.如果偏碱,可以适当调高培养箱二氧化碳的浓度.或者换新的培养基.特别是开启过的培养基,适用时间长容易出现这个问题.
c.我也遇到以上情况，根据经验很多次像这样的情况都是细胞冻存过程出了问题，另外复苏细胞溶解要迅速，我们有时候水浴锅刀38度，甚至40度，目的是让其快速解冻，而且复苏*次的培液血清浓度可以相对我高一点，等第二次换液时换回10%。
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ø 擦拭镜头可用沾酒精/乙混合液或二甲苯的镜头纸或脱脂棉。
ø 擦拭涂漆表面，可用纱布除去灰尘。若有油渍污垢，用纱布沾少许汽油去除，不能用有机溶剂
(如：酒精乙和其它稀释剂)擦拭涂漆表面和塑料部件。
ø 仪器不使用时，用有机玻璃或聚乙烯罩上，并存放于干燥且没有霉菌滋生的地方。
ø 物镜和目镜放在有干燥剂的密闭容器中。
1、我把细胞从-80度的冰箱拿出来复苏，期间没有污染，放二氧化碳孵箱后*天在显微镜下看，发现很多漂浮的死细胞，贴壁的细胞很少，但培养液是清亮、桃红色的，液面上可见漂浮着很多死细胞(我用的是dmem+10%胎牛血清的培养液)；我又把它放回孵箱；第二天看，和*天一样，我就换液了；第三天看，镜下基本未见什么细胞了。之前师兄给我说这种细胞长得慢(甲状腺癌k1细胞)，但是不至于不长，说明没有复苏成功。
可能的原因有：
a. -80度冻存细胞的时间太长，一般如果需要长期保存的话，超过一个月。转入液氮。
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换液太快，培养体系太大，如果细胞状态不好，保持较小的培养容积，以获得较高的细胞密度。如果培养基还是桃红色，说明细胞的代谢活动很弱，此时不宜换液。不知道你这个细胞是喜欢聚集生长还是离散生长。根据条件调节。比如，如果喜欢聚堆长，建议先倾斜培养瓶/皿，2h为一个时间间隔，观察细胞状态，以作调整。
b.估计是细胞在冻存时消化过度，导致细胞状态不好。
如果*天能见到贴壁的话,说明还是可以的.有时候培养基颜色偏紫,细胞贴壁会有问题的.你核实一下你培养基颜色是否偏碱.如果偏碱,可以适当调高培养箱二氧化碳的浓度.或者换新的培养基.特别是开启过的培养基,适用时间长容易出现这个问题.
c.我也遇到以上情况，根据经验很多次像这样的情况都是细胞冻存过程出了问题，另外复苏细胞溶解要迅速，我们有时候水浴锅刀38度，甚至40度，目的是让其快速解冻，而且复苏*次的培液血清浓度可以相对我高一点，等第二次换液时换回10%。
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