小反刍兽疫病毒检测试剂盒-PCR法

本试剂盒针对小反刍兽疫病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含小反刍兽疫病毒基因组模板的情况下，pcr反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量pcr仪对pcr过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序号
组成
25t/盒
50t/盒
1
pprvrt-pcr反应液
437.5μl×1管
875μl×1管
2
pprv混合酶液
62.5μl×1管
125μl×1管
3
pprv阳性对照
40 μl×1管
40 μl×1管
4
pprv阴性对照
40 μl×1管
40 μl×1管
5
说明书
1份
1份
注：阴性对照为偶蹄兽类基因组dna，阳性对照为失去活性的小反刍兽疫病毒cdna。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】abi 系列、bio-rad系列、agilent stratagene mx系列 、roche lightcycler r480、cepheid smartcycler、rotor-gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量pcr仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2.标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml pbs(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】
1.试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1t）+阳性对照数（1t）+误差预留量（1t）+样本数
单反液配制表
rt-pcr反应液
17.5μl
混合酶液
2.5μl
（3）在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μl/管分装量将试剂分装至pcr反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用qiagen、roche公司rna提取试剂盒提取rna，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的pcr反应样本管中分别加入处理好的待测标本rna各5 μl、终体积25 μl/管，盖好pcr反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到pcr仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μl试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好pcr反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到pcr仪器上。
4. pcr（pcr扩增区）
（1）取样本处理区准备好的pcr反应管，放置在实时荧光定量pcr仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行pcr扩增。
反应体积
25 μl
通道选择
fam通道采集小反刍兽疫病毒荧光信号
pcr
反应
条件
步骤
条件
循环数
反转录
50℃：10分钟（min）
1
预变性
95℃：3分钟（min）
1
pcr扩增
95℃：5秒（s）
40
55℃：40秒（s）
（此阶段结束时采集荧光信号）
注：abi系列荧光pcr仪在设置时不选rox校正，设置淬灭基团选择none。
【参考值（参考范围）】
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型s型扩增曲线或ct值≤35。
（2）阴性对照：ct值＞38或无ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标本结果判定：
（1）阳性：标本检测结果ct值≤35或有明显指数增长期。
（2）可疑：标本检测结果ct值在35～38范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标本检测结果ct值＞38或无ct值。
【检验结果的解释】
通道及检测结果
标本检测结果解释
fam
阳性（＋）
标本中检出小反刍兽疫病毒rna
阴性（－）
标本中未检出小反刍兽疫病毒rna

---

精密行星减速机正确的安装、使用和维护
借助中非农业现代化合作计划，雷沃农机产品推广稳中有升
江西防火涂层板*厂家
DZ-C 水产养殖水质检测仪
Coriell DNA标准品NA12878介绍
小反刍兽疫病毒检测试剂盒-PCR法
潜水式搅拌器组成部件的作用说明
高剪切均质乳化机在饮料行业中的应用
潍坊美的空调工程施工要注意什么？
DANFOSS制冷需要拥抱数字化到达Z世代
电子汽车衡现场试验的替代法
重庆磨床过滤机增加了磁性分离器，使机床切削液实现了二级过滤
笔记本转轴扭力机开发原因以及简介
铝用炭块空气反应性测定仪-GCTKK-700产品介绍
在线计数粒径检测仪是开发设计的*
岩棉保温板的防潮和耐用性能非常好
Q611F气动不锈钢三片式内螺纹球阀之产品特性及应用
二维材料PdPS线性二色性转换特性研究
日产550吨化灰机发展前景非常客观
全自动袖口式热收缩PE膜岩棉板包装机