动物支气管炎病毒(AIBV)核酸检测实验
动物支气管炎病毒(aibv)核酸检测实验
实验目的：
检测动物体液、肾脏、淋巴结、咽、泄殖腔试子、肺脏等组织标本以及细胞培养液中传染性支气管炎病毒(aibv)rna，适用于传染性支气管炎病毒(aibv)感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。
实验原理：
选取一对支气管炎病毒(aibv)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用trizol提取rna，经逆转录酶作用将rna转录成cdna，后者在taq酶作用下，配以fq-buffer(内含mg2+、tris-hcl等)、四种核苷酸单体（dntps）等成分，用一步pcr荧光探针法对禽传染性支气管炎病毒(aibv) rna进行扩增，从而达到快速检测之目的。
标本采集：
1）：咽及泄殖腔等试子标本采集：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，将试子放入盛有1.0ml pbs(或生理盐水)的离心管中，立即送检。
2）：组织标本采集：取动物肺、肝、脾、肺、肾、淋巴结及胰腺等组织约1g，置入1.5ml洁净ep管，立即送检。
3）：体液及培养液体标本采集：取上述标本约1ml，置入1.5ml洁净ep管，立即送检。
实验方法：
1）：样品处理：
培养物、试子等液体标本：将标本充分混匀，取100μ液体标本加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。
固体组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入500μl rna提取液a（trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的ep管中，室温放置5min。
2）：加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min，4℃ 13,000rpm离心5min。
3）：小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10μl rna提取液b（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。
4）：.弃上清，加入500μl 75%的depc乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。
5）：.将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20µl depc h2o溶解沉淀。
阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。后按1.2~1.5操作。
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实验目的：
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实验原理：
选取一对支气管炎病毒(aibv)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用trizol提取rna，经逆转录酶作用将rna转录成cdna，后者在taq酶作用下，配以fq-buffer(内含mg2+、tris-hcl等)、四种核苷酸单体（dntps）等成分，用一步pcr荧光探针法对禽传染性支气管炎病毒(aibv) rna进行扩增，从而达到快速检测之目的。
标本采集：
1）：咽及泄殖腔等试子标本采集：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，将试子放入盛有1.0ml pbs(或生理盐水)的离心管中，立即送检。
2）：组织标本采集：取动物肺、肝、脾、肺、肾、淋巴结及胰腺等组织约1g，置入1.5ml洁净ep管，立即送检。
3）：体液及培养液体标本采集：取上述标本约1ml，置入1.5ml洁净ep管，立即送检。
实验方法：
1）：样品处理：
培养物、试子等液体标本：将标本充分混匀，取100μ液体标本加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。
固体组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入500μl rna提取液a（trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的ep管中，室温放置5min。
2）：加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min，4℃ 13,000rpm离心5min。
3）：小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10μl rna提取液b（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。
4）：.弃上清，加入500μl 75%的depc乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。
5）：.将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20µl depc h2o溶解沉淀。
阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl rna提取液a（trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。后按1.2~1.5操作。
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