石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
一、石蜡切片
把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对he染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片
冰冻切片(frozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染的一种切片方法，其的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性,以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法
(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。方法包括：
a:干冰—丙酮(乙醇)法：
将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。将组织(大小为lcm×0．8cm×0，5cm)投入异戊烷内速冻30～60秒后取出，置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
b:液氮法：
将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒(直径约2cm)，可适量加oct包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持原位，切勿浸入液氮中，大约10～20秒后组织即迅速冰结成块。取出冷冻的组织块立即置人恒冷箱切片机冷冻切片或置人-80℃冰箱贮存备用。
(2)应用蔗糖溶液：
将组织置于20％～30％蔗糖溶液l～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量，可防止或减少冰晶的形成。
2．恒冷箱切片法
冷冻后的组织块即可用于恒冷箱切片，其过程包括以下步骤：
(1)组织包埋根据研究目的取所需组织(如切取小鼠肝脏1．0cm×l．0cm×0．5cm大小的组织块)，用滤纸吸去多余水分，将组织块平放于用特制锡纸小盒(直径约2cm)或软塑瓶盖内。加适量oct包埋剂浸没组织，40℃浸透20—30分钟。为防止冰晶形成，包埋前可进行蔗糖处理。
(2)组织冷冻：按上述干冰—丙酮(乙醇)法或液氮法冷冻组织。
(3)切片：
切片前1小时将恒冷箱切片机的温度设定为-18℃左右，以备切片。切片时温度以-15—-18℃为宜，温度过低组织易破碎。刀的角度要适当,否则不易连片。用载玻片贴附组织切片时，勿上下移动。未经固定的新鲜组织在冰冻切片后应使用相应的固定剂固定10分钟。冰冻切片后如不立即染色，必须用电风扇吹干，贮存于-70℃低温冰箱内或进行短暂预固定后低温冰箱保存。染色前从冰箱内取出切片，置室温干燥10分钟，再经冷丙酮固定5～10分钟(未固定者)，pbs漂洗3次后即可进入染色程序(he染色可用甲醛、冰醋酸和95％乙醇快速固定1—2分钟)。
(4)冰冻切片的保存：
冰冻切片后如不能及时染色，可在干燥后装入密封的标本盒内，外包塑料袋，贮存于低温冰箱，或进行短暂预固定后于低温冰箱保存。
三、振动切片
用振动切片机(vibratome)可以把新鲜组织(不固定、不冷冻)切成20～400pm的厚片，或者切经过固定的动植物标本。 以漂浮法在反应板内进行组织化学或免疫组织化学染色。因组织不冷冻，无冰晶形成也无组织抗原破坏，染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，故能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原。
振动切片主要用于显示神经系统抗原分布的研究。对于柔软的胚胎脑组织，可用低熔点(45—55℃)10％琼脂糖包埋，振动切片机切成厚片(40—100gm)，采用漂浮法在反应板内进行免疫荧光组织化学染色，激光扫描共聚焦显微镜观察。
振动切片方法简单、快速，能使组织比较完整的保留，适合组织电生理学等研究。与冰冻切片相比，无需冰冻组织，不会形成冰晶或破坏组织抗原。与石蜡切片相比，不需要脱水、透明、浸蜡等过程，避免对抗原的损害。
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把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对he染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片
冰冻切片(frozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染的一种切片方法，其的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性,以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法
(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。方法包括：
a:干冰—丙酮(乙醇)法：
将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。将组织(大小为lcm×0．8cm×0，5cm)投入异戊烷内速冻30～60秒后取出，置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
b:液氮法：
将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒(直径约2cm)，可适量加oct包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持原位，切勿浸入液氮中，大约10～20秒后组织即迅速冰结成块。取出冷冻的组织块立即置人恒冷箱切片机冷冻切片或置人-80℃冰箱贮存备用。
(2)应用蔗糖溶液：
将组织置于20％～30％蔗糖溶液l～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量，可防止或减少冰晶的形成。
2．恒冷箱切片法
冷冻后的组织块即可用于恒冷箱切片，其过程包括以下步骤：
(1)组织包埋根据研究目的取所需组织(如切取小鼠肝脏1．0cm×l．0cm×0．5cm大小的组织块)，用滤纸吸去多余水分，将组织块平放于用特制锡纸小盒(直径约2cm)或软塑瓶盖内。加适量oct包埋剂浸没组织，40℃浸透20—30分钟。为防止冰晶形成，包埋前可进行蔗糖处理。
(2)组织冷冻：按上述干冰—丙酮(乙醇)法或液氮法冷冻组织。
(3)切片：
切片前1小时将恒冷箱切片机的温度设定为-18℃左右，以备切片。切片时温度以-15—-18℃为宜，温度过低组织易破碎。刀的角度要适当,否则不易连片。用载玻片贴附组织切片时，勿上下移动。未经固定的新鲜组织在冰冻切片后应使用相应的固定剂固定10分钟。冰冻切片后如不立即染色，必须用电风扇吹干，贮存于-70℃低温冰箱内或进行短暂预固定后低温冰箱保存。染色前从冰箱内取出切片，置室温干燥10分钟，再经冷丙酮固定5～10分钟(未固定者)，pbs漂洗3次后即可进入染色程序(he染色可用甲醛、冰醋酸和95％乙醇快速固定1—2分钟)。
(4)冰冻切片的保存：
冰冻切片后如不能及时染色，可在干燥后装入密封的标本盒内，外包塑料袋，贮存于低温冰箱，或进行短暂预固定后于低温冰箱保存。
三、振动切片
用振动切片机(vibratome)可以把新鲜组织(不固定、不冷冻)切成20～400pm的厚片，或者切经过固定的动植物标本。 以漂浮法在反应板内进行组织化学或免疫组织化学染色。因组织不冷冻，无冰晶形成也无组织抗原破坏，染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，故能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原。
振动切片主要用于显示神经系统抗原分布的研究。对于柔软的胚胎脑组织，可用低熔点(45—55℃)10％琼脂糖包埋，振动切片机切成厚片(40—100gm)，采用漂浮法在反应板内进行免疫荧光组织化学染色，激光扫描共聚焦显微镜观察。
振动切片方法简单、快速，能使组织比较完整的保留，适合组织电生理学等研究。与冰冻切片相比，无需冰冻组织，不会形成冰晶或破坏组织抗原。与石蜡切片相比，不需要脱水、透明、浸蜡等过程，避免对抗原的损害。
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