鱼腥藻毒素a crm-atx 校准溶液anatoxin-a(atx-a)是一种蓝藻毒素,与北美[1]和全球[2]的动物死亡有关。鱼腥藻毒素acrm-atx是一种经认证的校准液,用于协助分析人员测定atx-,每个安瓿中含有大约0.5毫升的atx-a,以0.01%的乙酸溶解在甲醇水中(9:91,viv)。
鱼腥藻毒素acrm-atx是一种校准溶液标准物质(crm),用于atx-a的分析方法开发和精确定量。鱼腥藻毒素acrm浓度使其适合于制备用于仪器校准的稀释系列,如用紫外吸收法(lc-uv)、荧光法(lc-fl)或质谱法(lc-ms)检测的液相色谱,以及用于回收实验的控制样品。
atx的准备
鱼腥藻毒素aatx-a是从一种异青藤的藻类培养物中分离得到的。从细胞中提取毒素,经层析纯化后,真空干燥至无水形态[4.5]。将纯化的atx-a溶于9:91的脱气甲醇中,用0.01%的乙酸溶解制得crm溶液。溶液与聚四氟乙烯包覆搅拌棒和磁混合器充分混合,在氩气下搅拌.在琥珀玻璃安瓿中预先加入氩,然后立即进行火焰密封,每个安瓿中含有约0.5毫升的溶液。
同质性:由于鱼腥藻毒素acrm-atx 校准溶液是一个真正的解决方案,所以安瓿之间的变化应该很小。然而,大约0.8%的安瓿是随机选择的,atx-a浓度是用lc-uv测量的。安瓿之间的变化不大于对一种溶液进行复制分析时的变化,因此在整个安瓿范围内表现出可接受的同质性。
稳定性研究:已进行了广泛的研究,以确定鱼腥藻毒素acrm-atx 校准溶液在各种条件下的稳定性。atx-a在碱性溶液中不稳定,对光敏感[10]。对以前的atx-a制剂的可行性研究表明,贮存在+4°c的水溶液-储存酸化甲醇/水的溶液具有良好的长期稳定性。在几种温度(-80°c,-20°c,+4°℃,+25 c和+37°c)下,对crm-atx进行了长期稳定性研究。atx--在-20°c储存,在+4°c下分解小于3%,10天后在+37°c保存时,其降解率小于2%。
结构确认和纯度评估
采用500 mhz核磁共振谱、lc-ms[6j,lc-uv]、毛细管电泳-紫外检测(ce-uv)[7]和液相色谱-化学发光氮检测(lc-clnd)[8]等技术对该毒素的纯度进行了检测。用核磁共振[9]和四极飞行时间(qtof)质谱确证了atx-a的分子结构.[m+h]~*离子在166.12269da,在理论单同位素质量166.12264 da(=0.30ppm)的0.05mda范围内,获得了[m+h]~*离子的串联质谱谱,如图2.nmr、lc-ms、lc-uv和lc-clnd所示,未观察到主要杂质。
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